【圖】植物RNA提取 北京植物RNA提取 棉花RNA提取 |
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北京艾德萊生物有著植物RNA提取,北京植物RNA提取的研究院,例如棉花RNA提取、蘋果RNA提取等。
一般公司多糖多酚植物RNA提取試劑盒失敗原因和解決方案:很多植物RNA的樣品由于含有大量的多糖、多酚、代謝產(chǎn)物、色素等成分,造成RNA提取過程中氧化、褐化、降解、由于植物品種的多樣性造成情況更加復(fù)雜。手工的CTAB類的方法提取因為時間太長,太繁瑣,手工方法不在討論之列。一直以來沒有一款好的試劑盒包括qiagen、promega等進口試劑盒也無法滿足科研工作者對植物RNA提取的要求。
下面我們來分析一下植物RNA為什么不能提取成功的原因:市面上最常見的RNA提取試劑盒無非是兩種:第一種:TRIzol改良類方法(包括溶液型的和離心柱型的)、第二種:直接裂解過柱子的方法(離心柱)
第一種試劑盒失敗的原因1:RNA市面上面最流行的方法就是TRIzol,或者TRIzol改良,或者TRIzol加離心柱一類的改良方法。TRIzol也就是異硫氰酸胍/苯酚/氯仿原理一步法的方法最適合的對象是動物源性的組織細胞,針對普通多糖多酚低的植物性的材料,TRIzol類原理產(chǎn)品也可以提取。但是多糖、多酚、次級代謝產(chǎn)物豐富的情況下,TRIzol類方法無法防止多糖多酚對于RNA/DNA分相的干擾,要么殘留大量DNA,要么殘留大量多糖、多酚或者次級代謝產(chǎn)物,氧化破壞RNA,或者殘留這些多糖多酚,色素代謝產(chǎn)物等抑制下游的反轉(zhuǎn)錄等反應(yīng)。限于技術(shù)水平的限制,市面上絕大多數(shù)的國產(chǎn)廠家是使用TRIzol的方法進行改良,無論是不是加了離心柱。但是實踐證明,改良不能從根本上解決問題。判斷是否試劑盒使用這種改良的方法非常簡單:是否裂解液含有苯酚的味道和使用氯仿,如果使用到了氯仿就是TRIzol方法的改良。
第二種試劑盒失敗的原因:直接裂解過柱子的方法是目前最先進的方法,但是也是技術(shù)含量最高的方法。這個方法采用裂解液(不含苯酚,氯仿)直接裂解,RNA/DNA同時過柱子,然后在柱子上面直接分離RNA/DNA,所以,這種方法的優(yōu)點第一在于,避免了使用trizol在多糖多酚下不能成功分離RNA/DNA的弊端、第二在于,不使用有毒的苯酚氯仿。但是正是因為其技術(shù)先進,所以難度很高,國內(nèi)廠家包括進口公司有兩個技術(shù)難點一直沒有突破。第一,裂解液的成分必須針對去除多糖多酚進行研發(fā)添加去多糖多酚,代謝產(chǎn)物成分。否則會同樣碰到多糖多酚干擾提取的問題。第二、和TRIzol原理不同,直接過柱法DNA/RNA同時加到吸附柱上去。如何去除DNA是第一個難點。否則會殘留大量DNA。 |
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