關(guān)鍵字：試劑盒,檢測試劑盒,檢測試紙條,金標(biāo)檢測卡,速測卡,elisa試劑盒
dbzz一、 原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測水產(chǎn)和雞肉等組織樣本中的硝呋索爾，在微孔條上預(yù)包被上偶聯(lián)抗原，利用抗原與抗體的特異性免疫化學(xué)反應(yīng)的原理來進(jìn)行的，樣本中的硝呋索爾和微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗硝呋索爾衍生物抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣品中的硝呋索爾含量與樣品的吸光度值呈反比，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出硝呋索爾含量。
二、 試劑盒技術(shù)指標(biāo)：
試劑盒靈敏度： 0.1ppb
樣本檢測下限：
組織、蜂蜜 0.2ppb
魚/蝦等水產(chǎn)品組織因存在一定的干擾，檢測下限為0.3ppb
回收率：
魚/蝦水產(chǎn)組織 90%±15%
蜂蜜/雞肉/肝臟樣本 80%±15%
交叉反應(yīng)率：
硝呋索爾代謝物 100%
呋喃唑酮代謝物 ﹤0.1%
呋喃妥因代謝物﹤0.1%
呋喃西林代謝物﹤0.1%
三、試劑盒組成
1．微量測試孔：96T/8孔
2．標(biāo)準(zhǔn)品液： 0ppb 0.1 ppb 0.3ppb 0.9ppb 2.7ppb 8.1ppb （1ml/瓶）
3．酶標(biāo)記物 12ml
4．抗體工作液 7ml
5．底物緩沖液 7 ml
6．底物液 7 ml
7．終止液 7 ml
8．20倍濃縮洗滌液 50 ml
9．復(fù)溶液 50 ml
10．15.1mg衍生化試劑
四、 所用儀器、試劑
具備的儀器： 微孔酶標(biāo)儀、打印機、均質(zhì)器 、氮氣吹干裝置、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）
微量移液器： 單道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道250µl
試 劑： 甲醇、氫氧化鈉、乙酸乙酯、正己烷、濃HCl、磷酸氫二鉀、鄰硝基苯甲醛、亞硝基鐵氰化鉀（K2Fe（CN）5·NO·3H2O）ZnSO4·7H2O
五、樣本前處理步驟
樣本處理前須知
處理任何樣本時，都必須注意：
（a）實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實驗結(jié)果。
樣本前處理需配制：
1．衍生化試劑 稱15.1mg鄰硝基苯甲醛加甲醇10ml溶解(濃度10mM)
2．C液：（供奶樣用）稱12.5g亞硝基鐵氰化鉀用去離子水定溶至100ml。
D液：（供奶樣用）稱29.8g 硫酸鋅用去離子水溶解定溶至100ml。
3．0.1M K2HPO4 稱22.8g K2HPO4·3H2O
加去離子水溶解定溶至1L
4．1M HCl取8.6ml濃HCl加水定溶至100ml。
5．1M NaOH稱取4g NaOH加水定溶至100ml。
樣本的處理
(a) 肉樣或魚蝦
用均質(zhì)器均質(zhì)樣本,接（d）的描述方法
(b) 奶樣
1. 取出5ml的奶樣本到玻璃離心管中,分別加入C液和D液各250µl。
2. 用振蕩器充分混合樣本,用恒溫離心機4000r/min以上離心10min(4-12℃).若沒有恒溫離心機,則先將樣本降溫至大約8℃,然后離心。
3. 接(d)的描述方法
(c) 蜂蜜
1. 取1±0.05g樣本到離心管中。
2. 加入4ml的去離子水溶解,再加入0.5ml 1M HCl和100µl衍生化試劑,充分振蕩。
3. 接(d)第2步描述方法
(d)接上面的方法
1. 取1±0.05g的均質(zhì)樣本(肉樣/魚蝦)、牛奶的離心上清液1.1ml（相當(dāng)1ml奶樣），分別加入4ml的去離子水，0.5ml 1M HCl和100µl衍生化試劑，充分振蕩。
2. 置于56℃環(huán)境中孵育（2h）。
3. 分別加入5ml 0.1M K2HPO4， 0.4 ml 1M NaOH和5ml的乙酸乙酯，充分振蕩30s；
4. 在室溫下（20-25℃）4000r/min以上離心10min。
5. 取出2.5ml的乙酸乙酯到另一潔凈容器中于50℃氮氣/空氣吹干。
6. 用1ml正己烷溶解干燥物，用1ml已稀釋好的復(fù)溶液充分混合；在室溫下（20-25℃）4000r/min以上離心10min。
7. 取50µl下層相用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：2
六、操作步驟
1． 將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出并將所需試劑從試劑盒取出，置室溫（20-25℃）平衡30min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2． 按需要取出微孔條及板架，將不用的微孔板重新密封，保存于2-8℃，不要冷凍。
3． 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50µl /孔，然后加入抗體工作液50µl /孔，再振蕩混勻，用封板膜蓋板，室溫反應(yīng)30min。
4． 洗板4-5次，每次浸泡30秒，拍干。
5． 加入酶標(biāo)記物100µl /孔，用封板膜蓋板，室溫反應(yīng)20min。
6． 洗板4-5次，每次浸泡30秒，拍干。
7．顯色：每孔加入底物緩沖液50µl，再加底物液50µl，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境避光顯色10min。
8．測定：每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（在20min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定吸光度值。
七、結(jié)果判定
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以硝呋索爾標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中硝呋索爾實際濃度。
八、注意事項
1．室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20-25℃）會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2．洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
3．混合要均勻，洗板要徹底，否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
4．反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5．將不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封; 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
6．不要使用過了有效日期的試劑盒，不要使用不同批號試劑盒中的試劑。
7．顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之，0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.6時，表示試劑可能變質(zhì)。
8．該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25 ℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
九、儲藏條件和保質(zhì)期
儲藏條件：試劑盒于2-8℃保存，不要冷凍。
保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為1年，生產(chǎn)日期見包裝盒
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